pei转染试剂配制

pei转染试剂配制

‌‌PEI转染试剂配制方法‌‌‌配制PEI储存液‌：称取适量的PEI粉末（如125 mg），溶解于适量的1×HBS（pH7.4）中，通常使用50 ml以配制100 μM的储存液。使用0.2 μm滤膜过滤溶液，并储存于4℃备用。另一种配制方法是以serochem PEI为例，将100 mg PEI Prime粉末溶于80 mL细胞培养级水中，逐渐加入0.1 M氢氧化NA溶液调节pH至7.0 ± 0.1，最后定容至100 mL，并进行无菌过滤。‌配制1×HBS（pH7.4）‌：将8.76 g NaCl溶解于900 ml超纯水中，加入20 ml 1 M的HEPES，调节pH值至7.4，定容至1 L。使用0.2 μm滤膜过滤后，储存于4℃备用。‌制备PEI-DNA混合物‌：在一个离心管中，将适量的质粒DNA（如2-8 μg）加入HBS中混匀。在另一个离心管中，用HBS将PEI储存液稀释至所需浓度（如10 μM）。将稀释后的PEI溶液加入含有DNA的HBS中，充分混匀后室温静置20-30分钟。另一种方法是，向DNA稀释液中加入适量的PEI转染试剂（如4 μL PEI 40000对应2 μg DNA），轻轻混匀后室温孵育10-20分钟。PEI转染试剂配制注意事项*‌储存条件‌：PEI储存液和1×HBS应储存于4℃，避免反复冻融。‌无菌操作‌：在配制和过滤过程中，应确保无菌操作，避免污染。‌pH调节‌：在配制PEI溶液时，需准确调节pH值至适宜范围（如7.0 ± 0.1），以保证转染效率。‌比例优化‌：建议进行不同基因转染时，对PEI和DNA的比例进行优化，以达到最佳转染效果。‌转染前准备‌：转染前需确保细胞处于良好的生长状态，且细胞密度适宜（如70%-90%贴壁）。‌转染后处理‌：转染后需及时更换培养基，并继续培养至适当时间以观测基因表达情况。